Quantitative Real Time PCR in Ihrem Auftrag
Sie möchten Gene oder deren Expression
quantifizieren, aber es fehlt Ihnen an technischen oder personellen Möglichkeiten?
Oncoscreen hat die Lösung!
Durchführung quantitativer PCR und RT-PCR in Ihrem Auftrag
Überlassen Sie es uns, Ihre Fragen zur quantitativen Analyse von Nukleinsäuren zu beantworten. Unsere promovierten Molekularbiologen erarbeiten Problemlösungen, die speziell auf Ihre Fragestellungen zugeschnitten sind.
Unsere Dienstleistungen werden am ABI Prism® 7700 Sequence Detector System mit Hilfe der effizienten TaqMan®-Chemie durchgeführt.
Nutzen Sie die Expertise von Oncoscreen, um Ihre eigenen Projekte zu beschleunigen.
Wir akzeptieren alle Arten biologischer Proben einschließlich paraffin-konservierter Proben bzw. bereits extrahierter Nukleinsäuren. Mittels optimierter Extraktionsmethoden isolieren wir für Sie auch Nukleinsäuren in konstant hoher Qualität – eine Voraussetzung für präzise, quantitative PCR-Analysen.
Als Ergebnis liefern wir Ihnen einen Analysebericht mit graphischen Darstellungen, Erklärungen zum experimentellen Protokoll und zur Auswertung Ihrer Daten.
Einige Anwendungsbeispiele finden Sie auf den Seiten "Molekularbiologische Begleitung Ihrer klinischen Studien" und "Eigene klinische Studien der Oncoscreen GmbH".
Für weitere Fragen steht Ihnen unser Team jederzeit zur Verfügung.
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Rohdaten der Quantifizierung von zwei Genen (rot und blau) in vier Verdünnungsstufen (1:2.5) einer cDNA. |
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10 ml - Aliquots von Blut eines gesunden Probanden wurden mit 50 bis 100.000 Zellen der Linie HepG2 versetzt. Anschließend wurde cDNA gewonnen und das alpha-Fetoprotein-Gen (AFP) quantifiziert. AFP wird von HepG2 exprimiert und ist im Blut gesunder Probanden kaum nachweisbar. |
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Aus einer Probe wurden im Laufe von vier Monaten 17 verschiedene cDNA-Präparate hergestellt und jeweils die Expression der Thymidylat-Synthetase gemessen. |
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Ein Angebot für Neueinsteiger
Spielen Sie mit dem Gedanken, die TaqMan-PCR in Ihrem Labor zu etablieren, schrecken aber vor dem hohen Kostenrisiko zurück?
Dann haben wir ein Angebot für Sie:
- wir entwickeln Ihre ersten professionellen Primer/Sonden Sätze
- wir führen erste Experimente für Sie durch, die es Ihnen ermöglichen, den Erfolg Ihres geplanten Projektes besser einschätzen zu können
- wir beraten Sie bei der Einführung der TaqMan Technik in Ihrem Labor
- unsere ersten Messergebnisse geben Ihnen Standards an die Hand, an denen Sie sich bei der Einführung der TaqMan Technik in Ihrem Labor orientieren können
Es steht Ihnen dabei völlig frei zu entscheiden, in welcher Phase des Projektes Sie die Technik in Ihr Labor überführen möchten. Wir sind natürlich auch gern bereit, Ihr Projekt bis zu seinem Abschluss in unserem Labor zu begleiten.
Für weitere Fragen steht Ihnen unser Team jederzeit zur Verfügung.
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Welche Primer sind geeignet?
Die von Oncoscreen verwendete quantitative TaqMan PCR basiert darauf, dass während der Annealingphase ein drittes Oligonukleotid zwischen den beiden Primern sequenzspezifisch an die Zielsequenz bindet. Dieses dritte Oligonukleotid (die TaqMan Sonde) ist fluoreszenzmarkiert. Während der Elongatiosphase wird die gebundene TaqMan Sonde von der Taq Polymerase hydrolysiert, eine dadurch verursachte Änderung ihres Emissionsspektrums wird für die Quantifizierung genutzt.
Dieser komplexe Prozess benötigt besondere Reaktionsbedingungen. Allgemein wird für die Primer eine Schmelztemperatur von 60 °C und für die TaqMan Sonde eine Schmelztemperatur von 70 °C als optimal betrachtet. Darüber hinaus sind beim Design der TaqMan Sonde besondere Regeln zu beachten, unter anderem sollte die TaqMan Sonde nicht mehr als 5 Nukleotide downstream eines Primers an die Zielsequenz binden. Aus diesen Gründen sind die meisten gängigen PCR Primer für eine Verwendung in der TaqMan PCR ungeeignet.
Oncoscreen hat fundierte Erfahrungen auf dem Gebiet der Entwicklung und Überprüfung von Primer/Sonden Sätzen für die TaqMan PCR. Wir entwerfen die Sätze, optimieren die Reaktionsbedingungen und überprüfen die Effizienz der PCR nach einem standardisierten Verfahren. Der Kunde erhält von uns nicht nur einen optimalen Primer/Sonden Satz, sondern auch wertvolle Hinweise für künftige Qualitätskontrollen, so dass die Sätze auch unabhängig von Oncoscreen nachbestellt und verwendet werden können.
Daneben besteht die Möglichkeit, eine zunehmende Zahl vorgefertigter
Primer/Sonden Sätze von Applied Biosystems, dem Hersteller und Vermarkter
von TaqMan-Zubehör zu beziehen. Sie werden unter der Bezeichnung
"TaqMan® Gene Expression Assays" und "TaqMan® SNP
Genotyping Assays" über die Website von Applied Biosystems angeboten:
http://www.appliedbiosystems.com
Neben dem Einsatz von TaqMan Sonden sind wir auch in der Lage, nach der Sybr®Green-Methode zu quantifizieren. Hier steht dem etwas geringeren Kostenaufwand jedoch eine erhöhte Artefakt-Anfälligkeit gegenüber, weshalb wir diese Methode nur in besonderen Fällen empfehlen.
Für weitere Fragen steht Ihnen unser Team jederzeit zur Verfügung.
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